細(xì)菌培養(yǎng)的基礎(chǔ)是配制培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方然后再加熱溶解，補(bǔ)足水分，其制作過(guò)程包括以下4個(gè)環(huán)節(jié)：

①清潔玻璃器皿  一般用肥皂液煮沸30 min,或用重鉻酸鉀和濃硫酸配制的溶液浸泡數(shù)10 min，然后用清水沖洗，晾干后保存?zhèn)溆谩?br/>②配制液體培養(yǎng)基  
a．根據(jù)需要配制培養(yǎng)基數(shù)量，先在燒杯中注入少量蒸餾水；
b．按培養(yǎng)基配方稱量各種成分的原料，依次使之溶解；
c．補(bǔ)足需水量；
d．如用牛肉膏、蛋白胨配制時(shí)，需加熱熔化后溶解；
e．加熱后，補(bǔ)足水分即可。
③配制固體培養(yǎng)基  在液體培養(yǎng)基里加入一定量的瓊脂，加熱熔化即可。
④調(diào)pH  先用精密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基滴加1 mol/L 的NaOH溶液，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)pH,直到7.4～7.6為止。反之則用1 mol/L的HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。
⑤過(guò)濾分裝  用紗布趁熱過(guò)濾，將濾液分裝于試管中，其量約為試管體積的1/5（不要玷污管壁）。
⑥加棉塞  培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口上加一個(gè)棉塞。棉塞能防止雜菌污染；保證通氣良好，加棉塞時(shí)，應(yīng)使棉塞長(zhǎng)度的2/3在試管口內(nèi)。
⑦包扎  每10支試管用線繩捆成一捆，并且在管口外面包上一層牛皮紙，然后用線繩扎好。在每捆試管外掛上標(biāo)簽，注明培養(yǎng)基名稱、配制日期和制作者姓名。

（2）滅菌  高壓蒸汽滅菌的效果是細(xì)菌培養(yǎng)的關(guān)鍵。
具體操作如下：
①打開(kāi)高壓滅菌鍋，取出里面的滅菌桶，向鍋內(nèi)加水（最好用開(kāi)水）水面與底架平齊為宜。
②將扎好的試管管口向上，豎放在滅菌桶內(nèi)，再將滅菌桶放回滅菌鍋。
注意：滅菌桶內(nèi)的物品不能放得太擠，否則會(huì)影響滅菌效果。
③加蓋，并將排氣軟管插入滅菌桶的排氣槽內(nèi)。以兩兩對(duì)稱的方式，同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)緊固螺栓，以防漏氣。
④排出鍋內(nèi)的冷空氣。
⑤當(dāng)鍋內(nèi)的壓力上升到規(guī)定壓力時(shí)，維持壓力20 min，切斷電源。
⑥壓力降至0以后，打開(kāi)排氣閥，排氣完畢打開(kāi)滅菌鍋。

（3）擱置斜面   如果要制作斜面培養(yǎng)基，將滅菌后的培養(yǎng)基冷卻到50℃，每個(gè)試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上，使培養(yǎng)基形成斜面，斜面的長(zhǎng)度不超過(guò)試管總長(zhǎng)度的一半。

(4) 檢驗(yàn)滅菌效果滅菌好的培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，檢驗(yàn)滅菌效果。