粗提取植物DNA的實驗步驟和原理
點擊次數(shù)：1287 更新時間：2023-05-16
提取植物DNA常用的方法是CTAB法。
原理：CTAB是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物，只是不能沉淀核酸。通過有機溶劑抽提，去除蛋白，多糖，酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。
步驟如下：
1）取材料，加液氮研磨成粉末狀，迅速移入1.5 ml Eppendorf管中；
（2）加入800 μl的CTAB提取緩沖液，混勻（CTAB在65℃水浴預(yù)熱），每5min輕輕震蕩幾次，20min后12000 r/min，離心15 min；
（3）小心吸取上清液，加入等體積的酚：氯仿（各400μl）溶液，混勻，4℃，12000 r/min，離心10 min；
（4）小心吸取上清液，加入等體積的氯仿，混勻，4℃，12000 r/min，離心10 min。
（5）重復(fù)步驟（4）1-2次，以蛋白層不出現(xiàn)為止；
（6）取上清，-20℃沉淀1h，4℃，12000 r/min，離心10 min；
（7）棄去上清液，用70%乙醇洗滌沉淀2次；
（8）室溫下干燥后（一般干燥5-15 min），溶于30-50 μl DEPC去離子水中，于-20℃或者-70℃下保存?zhèn)溆谩?br/>
