當(dāng)您選擇抗體時，一些有用的建議如下:

通過查閱文獻，查找使用過類似抗體的實驗室進行咨詢；

詢問其他實驗室成員是否已經(jīng)用過了適合您實驗的抗體；

檢查抗體的克隆性、應(yīng)用適應(yīng)性、宿主物種和種屬反應(yīng)性等各種數(shù)據(jù)。

查看供應(yīng)商提供的圖片和數(shù)據(jù)——數(shù)據(jù)是否可信、實驗結(jié)果優(yōu)劣鑒定？

參考引用該抗體的任何論文和論文中數(shù)據(jù)的表現(xiàn)選擇適合自己的抗體。

一抗選擇

01 確認(rèn)研究用途

研究主題是什么？

抗體的克隆性質(zhì)？

02 抗體的種屬？

樣本的種屬來源需要和抗體的種屬來源不同。像western blot這樣的實驗應(yīng)用，樣本是沒有內(nèi)源性免疫球蛋白(IgG)的細(xì)胞裂解液，或者使用直標(biāo)一抗的實驗應(yīng)用，都不用擔(dān)心這個問題。

如果不得不需要使用和樣本種屬來源相同的抗體 (如鼠抗鼠的抗體)，建議進行抗體定制服務(wù)。

03 非模式生物

如果研究對象為非模式生物，并且不得不要用一種在該物種中沒有被測試過的抗體。當(dāng)然很可能無法得到理想的結(jié)果，但是大部分的保守序列蛋白質(zhì)是可以被一個未經(jīng)驗證的抗體識別的。

因此，如果沒有很好地選擇，一般建議選擇對目標(biāo)生物的該蛋白進行序列比對，并且得出該蛋白序列是否足夠保守的結(jié)果。（Swiss-Prot蛋白數(shù)據(jù)庫鏈接中可以找到所需的序列，還有一些網(wǎng)站提供計算相似度的工具，例如多序列比對工具CLUSTALW.）

將抗體的免疫原序列與您想檢測的物種的蛋白序列進行比對，如果重合比對結(jié)果重復(fù)度大于85%，那么兩者可能會發(fā)生交叉反應(yīng)效應(yīng)（即使是比對得分大于85%，也無法*保證抗體一定會識別）需要使用多個對照來確定該抗體是按您預(yù)期與靶標(biāo)特異地結(jié)合。

關(guān)于二抗選取的幾個建議：

選擇蕞亮的熒光素來標(biāo)記表達(dá)量蕞低的蛋白質(zhì)

當(dāng)您使用多色標(biāo)記時，所有二抗應(yīng)該保持物種來源一致

如果您在實驗前用來自和二抗同一宿主物種的血清來封閉樣本，這將顯著降低背景

預(yù)吸附二抗 對于多色分析很有用，可確保較低的物種間交叉反應(yīng)性

片段抗體 更小且可高效得滲入組織（對IHC很有用）

生物素偶聯(lián)物可檢測低豐度蛋白