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細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識-冷凍細胞活化
點擊次數(shù):725 更新時間:2021-04-07

1. 冷凍細胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶重新結(jié)晶而對細胞造成傷害,導(dǎo)致細胞之死亡。

2. 細胞活化后,約需數(shù)日,或繼代一至二代,其細胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復(fù)正常 ( 例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì) ) 。

3. 材料

3.1 37 oC 恒溫水槽

3.2 新鮮培養(yǎng)基

3.3 無菌吸管 / 離心管 / 培養(yǎng)瓶

3.4 液氮或干冰容器

4. 步驟:

4.1 操作人員應(yīng)戴防護面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。

4.2 自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時蓋子易松掉。

4.3 將新鮮培養(yǎng)基置于 37 °C 水槽中回溫,回溫后噴以 70 % 酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。

4.4 取出冷凍管,立即放入 37 °C 水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在 1 分鐘內(nèi)全部融化,以 70 % ethanol 擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。

4.5 取出 0.9 ml 解凍之細胞懸浮液,緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi) ( 稀釋比例為 1:10 ~ 1:15) ,混合均勻,放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。另取 0.1 ml 解凍細胞懸浮液作存活測試。

4.6 解凍后是否立即去除冷凍保護劑 ( 例如 DMSO 或 glycerol) ,依細胞種類而異,一般而言,大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除,則將解凍之細胞懸浮液加入含有 5-10 ml 培養(yǎng)基之離心管內(nèi),離心 1,000 rpm, 5 分鐘,移去上清液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.7 若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。

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