人ELISA Kit又稱人白介素ELISA試劑盒，主要應(yīng)用于雙抗體夾心法測定標本中人白介素水平，用純化的人白介素抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素，再與HRP標記的白介素抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人白介素含量。

　　人ELISA Kit白介素試驗步驟分析：

　　1、標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

　　2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

　　4、配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　7、溫育：操作同3。

　　8、洗滌：操作同5。

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

　　10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

　　11、測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行。
 

　　人ELISA Kit白介素實驗要求：

　　1、標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2、不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。