1．單一固定液的性質(zhì)和用途
（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol）：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白，后者易溶于水，所以經(jīng)酒精固定的標(biāo)本對細(xì)胞核染色不良。酒精可溶解脂肪、類脂體，所以不能用酒精固定脂肪。酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖經(jīng)酒精固定后不能在低于70％酒精中保存。單獨固定使用酒精的濃度應(yīng)為95—100％。無水jiu精滲透力較差，并且能使組織收縮，在與醋酸、lv仿混合使用時，可增強(qiáng)它們的穿透力。酒精除固定作用外，還具有硬化和脫水的作用，固定后的組織可保存于70％酒精中，所以酒精在制片過程中用途很大。無水乙醇容易揮發(fā)，又容易吸收空氣中的水分，所以瓶蓋必須塞緊，為了吸去其中水分，最/好在無水乙醇瓶內(nèi)放入少量無水硫酸銅粉末。酒精是一種還原劑，不能與重鉻酸鉀、鋨/酸等氧化劑混合使用。
（2）甲jia醛（HCHO）（formeldehyde）：是一種氣體，溶于水成為甲jia醛水溶液或稱福爾馬林，一般使用濃度為10％福爾馬林（formalin）液，其配法是取市售的甲jia醛液10ml與90ml蒸餾水混合即可，實際上其含量只有4％甲jia醛。這樣的配法已成為一般實驗室常用的慣例。
甲jia醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能與蛋白質(zhì)化合。它是一種應(yīng)用廣泛，使用簡單的固定液，具有穿透力強(qiáng)、固定均勻、組織收縮小、硬度適當(dāng)，適用于一般器官組織的固定及保存。尤其對脂肪、神經(jīng)組織固定效果較好。更適于病理組織的制片及大體積標(biāo)本的保存，一般組織需固定24小時以上，固定后的組織可移入50％酒精中逐步脫水。
甲jia醛是一種強(qiáng)還原劑，不能與鉻酸、重鉻酸鉀、鋨/酸等氧化劑混合，因極易被氧化為甲酸。在配混合固定液時，如海利氏液等需臨用前再加入，24小時后失效。
甲jia醛由于長/期貯存，特別是低溫氣候，容易產(chǎn)生多聚甲jia醛，即溶液中的白色沉淀，在高溫下又成為甲jia醛。不純的甲jia醛易產(chǎn)生甲酸，使溶液變?yōu)樗嵝?，影響核的染色。所以在備用的福爾馬林中加入小量的醋酸鈣、碳酸鎂或大理石作為中和劑。可用下法配制10％中性甲jia醛溶液，pH為7.0左右：
40％甲jia醛100ml
蒸餾水900ml
磷酸2氫鈉（NaH2PO4·H2O）4.0g
磷酸氫2鈉（Na2HPO4）6.5g
甲jia醛醋酸鈣溶液：
40％甲jia醛10ml
醋酸鈣2g
蒸餾水加至100ml
（3）醋酸（CH3COOH）（aceticacid）：純醋酸在低溫時結(jié)成冰狀故又名冰醋酸，約在17℃時融化，能和水及乙醇混合。使用濃度為0.3—5％，它能很好地沉淀核蛋白，對染色質(zhì)的固定效果很好。醋酸對染色體的保存能接近生活狀態(tài)，因此在固定染色體的固定液中幾乎都含醋酸。醋酸的穿透力很強(qiáng)。它能使組織膨脹，常與其他藥劑配合使用，起抑制其他固定劑對組織收縮的作用。
醋酸破壞線粒體和高爾基體，所以在線粒體和高爾基體制片及固定液中都不用醋酸。
（4）ku味酸（C6H2（NO2）3OH）（picricacid）：是一種強(qiáng)酸，呈黃色結(jié)晶，溶于水、乙醇、苯和二甲苯。干燥時能自燃，爆炸，所以需濕性保存。一般配成飽和水溶液備用（100ml蒸餾水加1.2gku味酸）。
ku味酸能沉淀蛋白質(zhì)，對胞質(zhì)固定較好。ku味酸的穿透力很慢，能使組織強(qiáng)烈收縮，一般都與醋酸等藥劑配合使用。ku味酸固定的組織會出現(xiàn)黃色，可在低度酒精中加入少量碳酸li飽和水溶液，洗去黃色。如遺留少許黃色在組織中，對染色無影響。
（5）重鉻酸鉀（K2CrO7）（potassium dichromate）：呈橙紅色結(jié)晶，可溶于水，有毒，是強(qiáng)氧化劑，不應(yīng)和乙醇混合。它穿透力強(qiáng)，能使蛋白質(zhì)變?yōu)椴蝗苄?，能保持?xì)胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)與生活狀態(tài)相仿，并用于線粒體和高爾基復(fù)合器的固定，但需與甲jia醛、氯化/gong等混合使用，是細(xì)胞學(xué)良好的固定劑。重鉻酸鉀固定的組織需經(jīng)流水沖洗12—24小時。
（6）鉻酸（H2CrO4）（chromicacid）：為強(qiáng)氧化劑，是一種弱酸，呈紅色或淺褐色結(jié)晶，極易潮解，所以最/好配成1％的水溶液保存。它是強(qiáng)烈的沉淀劑，不單獨使用。硬化程度中等。固定肝糖的效果優(yōu)良，它使肝糖不溶于水。在固定線粒體和高爾基復(fù)合器的固定液中都含有鉻酸成分。
鉻酸穿透力較慢，不使組織收縮。固定后的組織需經(jīng)流水沖洗12小時以上，洗去鉻酸，否則會發(fā)生沉淀，影響染色。
1．單一固定液的性質(zhì)和用途
（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol）：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白，后者易溶于水，所以經(jīng)酒精固定的標(biāo)本對細(xì)胞核染色不良。酒精可溶解脂肪、類脂體，所以不能用酒精固定脂肪。酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖經(jīng)酒精固定后不能在低于70％酒精中保存。單獨固定使用酒精的濃度應(yīng)為95—100％。無水jiu精滲透力較差，并且能使組織收縮，在與醋酸、lv仿混合使用時，可增強(qiáng)它們的穿透力。酒精除固定作用外，還具有硬化和脫水的作用，固定后的組織可保存于70％酒精中，所以酒精在制片過程中用途很大。無水乙醇容易揮發(fā)，又容易吸收空氣中的水分，所以瓶蓋必須塞緊，為了吸去其中水分，最/好在無水乙醇瓶內(nèi)放入少量無水硫酸銅粉末。酒精是一種還原劑，不能與重鉻酸鉀、鋨/酸等氧化劑混合使用。
（2）甲jia醛（HCHO）（formeldehyde）：是一種氣體，溶于水成為甲jia醛水溶液或稱福爾馬林，一般使用濃度為10％福爾馬林（formalin）液，其配法是取市售的甲jia醛液10ml與90ml蒸餾水混合即可，實際上其含量只有4％甲jia醛。這樣的配法已成為一般實驗室常用的慣例。
甲jia醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能與蛋白質(zhì)化合。它是一種應(yīng)用廣泛，使用簡單的固定液，具有穿透力強(qiáng)、固定均勻、組織收縮小、硬度適當(dāng)，適用于一般器官組織的固定及保存。尤其對脂肪、神經(jīng)組織固定效果較好。更適于病理組織的制片及大體積標(biāo)本的保存，一般組織需固定24小時以上，固定后的組織可移入50％酒精中逐步脫水。
甲jia醛是一種強(qiáng)還原劑，不能與鉻酸、重鉻酸鉀、鋨/酸等氧化劑混合，因極易被氧化為甲酸。在配混合固定液時，如海利氏液等需臨用前再加入，24小時后失效。
甲jia醛由于長/期貯存，特別是低溫氣候，容易產(chǎn)生多聚甲jia醛，即溶液中的白色沉淀，在高溫下又成為甲jia醛。不純的甲jia醛易產(chǎn)生甲酸，使溶液變?yōu)樗嵝?，影響核的染色。所以在備用的福爾馬林中加入小量的醋酸鈣、碳酸鎂或大理石作為中和劑?？捎孟路ㄅ渲?0％中性甲jia醛溶液，pH為7.0左右：
40％甲jia醛100ml
蒸餾水900ml
磷酸2氫鈉（NaH2PO4·H2O）4.0g
磷酸氫2鈉（Na2HPO4）6.5g
甲jia醛醋酸鈣溶液：
40％甲jia醛10ml
醋酸鈣2g
蒸餾水加至100ml
（3）醋酸（CH3COOH）（aceticacid）：純醋酸在低溫時結(jié)成冰狀故又名冰醋酸，約在17℃時融化，能和水及乙醇混合。使用濃度為0.3—5％，它能很好地沉淀核蛋白，對染色質(zhì)的固定效果很好。醋酸對染色體的保存能接近生活狀態(tài)，因此在固定染色體的固定液中幾乎都含醋酸。醋酸的穿透力很強(qiáng)。它能使組織膨脹，常與其他藥劑配合使用，起抑制其他固定劑對組織收縮的作用。
醋酸破壞線粒體和高爾基體，所以在線粒體和高爾基體制片及固定液中都不用醋酸。
（4）ku味酸（C6H2（NO2）3OH）（picricacid）：是一種強(qiáng)酸，呈黃色結(jié)晶，溶于水、乙醇、苯和二甲苯。干燥時能自燃，爆炸，所以需濕性保存。一般配成飽和水溶液備用（100ml蒸餾水加1.2gku味酸）。
ku味酸能沉淀蛋白質(zhì)，對胞質(zhì)固定較好。ku味酸的穿透力很慢，能使組織強(qiáng)烈收縮，一般都與醋酸等藥劑配合使用。ku味酸固定的組織會出現(xiàn)黃色，可在低度酒精中加入少量碳酸li飽和水溶液，洗去黃色。如遺留少許黃色在組織中，對染色無影響。
（5）重鉻酸鉀（K2CrO7）（potassium dichromate）：呈橙紅色結(jié)晶，可溶于水，有毒，是強(qiáng)氧化劑，不應(yīng)和乙醇混合。它穿透力強(qiáng)，能使蛋白質(zhì)變?yōu)椴蝗苄?，能保持?xì)胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)與生活狀態(tài)相仿，并用于線粒體和高爾基復(fù)合器的固定，但需與甲jia醛、氯化/gong等混合使用，是細(xì)胞學(xué)良好的固定劑。重鉻酸鉀固定的組織需經(jīng)流水沖洗12—24小時。
（6）鉻酸（H2CrO4）（chromicacid）：為強(qiáng)氧化劑，是一種弱酸，呈紅色或淺褐色結(jié)晶，極易潮解，所以最/好配成1％的水溶液保存。它是強(qiáng)烈的沉淀劑，不單獨使用。硬化程度中等。固定肝糖的效果優(yōu)良，它使肝糖不溶于水。在固定線粒體和高爾基復(fù)合器的固定液中都含有鉻酸成分。
鉻酸穿透力較慢，不使組織收縮。固定后的組織需經(jīng)流水沖洗12小時以上，洗去鉻酸，否則會發(fā)生沉淀，影響染色。
（7）氯化/gong（HgCl2）（mer cury bichloride）：又稱升/gong，呈白色針狀結(jié)晶，能升華，是一種極毒的藥品，對粘膜有腐蝕作用，使用時需特別當(dāng)心。
氯化/gong能沉淀一切蛋白質(zhì)，使蛋白質(zhì)變性不溶于水，對一般染色效果很好，對固定線粒體和高爾基體的效果也很好。
氯化/gong穿透力較弱，收縮力較大，所以一般與醋酸、甲jia醛等混合使用。經(jīng)氯化/gong固定的組織會產(chǎn)生氯化亞gong沉淀，所以組織或切片需用0.5％碘酒處理3—5分鐘，除去沉淀物，然后用2％硫代liu酸鈉水溶液去碘處理1—2分鐘。
（8）四氧hua/鋨（OsO4）（osmiuln tatroxide）：又名鋨/酸（osmicacid）。是一種淡黃色結(jié)晶體，為強(qiáng)氧化劑，不可與酒精、甲jia醛混合，在配制使用過程中瓶皿需特別潔凈，固定濃度為1—2％水溶液。需用棕色瓶貯存于4℃冰箱內(nèi)。
鋨/酸是固定脂肪的最/好固定劑。穿透速度很慢，能均勻固定蛋白質(zhì)，能保持細(xì)胞生活時形態(tài)，不引起細(xì)胞收縮，對細(xì)胞質(zhì)的保存較好，特別適用于線粒體、高爾基復(fù)合器的固定。固定后的透明處理，用苯為透明劑可得良好的切片效果。
鋨/酸價格極貴，毒性高，蒸氣易損傷眼睛及粘膜，使用時應(yīng)加小心。
鋨/酸固定的組織切片，不易被蘇木精著色，需經(jīng)過漂白處理。
Lacour漂白液的配制：
20％H2O2 10ml
80％酒精30ml
將切片置此液中漂白4—12小時，移入80％酒精、70％酒精、50％酒精中各2分鐘，蒸餾水充分洗滌后，再進(jìn)行染色。
以上簡單的固定液各有優(yōu)缺點，如無水jiu精可固定肝糖，但不能固定脂肪，因脂肪易溶于酒精。而鋨/酸能固定脂肪，氯化/gong對蛋白質(zhì)固定較好，冰醋酸可以固定核蛋白等，它們只是對細(xì)胞的某些成分固定較好，而不能將所有成分都保存下來。如果互相配合使用，則能取長補(bǔ)短，得到較好的固定效果，只有了解藥品的性質(zhì)，才能清楚各固定液的性能。下面介紹幾種常用的混合固定劑。
2．混合固定液的配制和性能
（1）包音氏（Bouin’s）固定液
ku味酸飽和水溶液75ml
甲jia醛（40％）25ml
冰醋酸5ml
本液在使用前配制。
包音氏液為常用的良好固定劑，適用于無脊椎動物，組織學(xué)、胚胎學(xué)均可應(yīng)用。滲透力迅速，固定均勻，組織收縮少。小塊組織固定2—12小時，一般組織固定12—24小時，固定后用50％酒精洗滌數(shù)次。
此液固定的組織適于蘇木精、伊紅等染色。用馬瑞氏三色染色，能得艷麗的圖像。
（2）任克氏（Zenker's）固定液
重鉻酸鉀2.5g
氯化/gong6g
蒸餾水100ml
冰醋酸5ml
配制時將重鉻酸鉀、氯化/gong溶于加溫的蒸餾水，冰醋酸臨用前加入。此固定液適用于細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)的研究工作。固定時間一般需12—24小時。固定后要用流水沖洗12小時，用碘去gong。此液固定的組織適于一般染色，細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)染色較為清晰。
（3）海利氏（Helly's）液
重鉻酸鉀2.5g
氯化/gong6g
蒸餾水100ml
40％甲jia醛液5ml
此固定液是將任克氏配方中的冰醋酸換成甲jia醛液，甲jia醛也在用前加入，因在加入甲jia醛24小時后即生成沉淀而失效。固定時間12—24小時。海利氏液為骨髓、脾、肝等造血器官的較好固定劑。此液亦可保存線粒體，染色前需用碘去gong。
（4）蘇薩氏（Susa's）[海登哈音氏（Heidenhain's）]
液：
氯化/gong4.5g
氯化鈉0.5g
40％甲jia醛液20ml
三氯醋酸2g
冰醋酸4ml
蒸餾水80ml
將4.5g氯化/gong和0.5g氯化鈉溶于80ml蒸餾水中保存。臨用前取此液20ml，加入三氯醋酸0.5g，40％甲jia醛5ml，冰醋酸1ml，混合使用。
此液含有三氯醋酸和氯化鈉，對較硬的組織有軟化作用，如皮膚、蛔蟲卵、昆蟲幼蟲等角質(zhì)層較厚的組織，食道、胃均能適用。它具有滲透快、收縮小的優(yōu)點。小塊組織固定3—5小時；大塊組織，如皮膚固定12—24小時。固定后可直接入95％酒精洗滌，勿入水或低度酒精，否則易使膠原纖維膨脹。切片在染色前，用碘去gong。
（5）卡諾氏（Carnoy's）液
純酒精60ml
lv仿30ml
冰醋酸10ml
此液穿透力強(qiáng)，對核固定優(yōu)良，是細(xì)胞學(xué)制片常用的固定液。酒精能固定胞漿及沉淀肝糖，冰醋酸能固定染色質(zhì)并防止酒精過度硬化和收縮，lv仿可增加滲透力。小白鼠的睪丸和馬蛔蟲的子宮固定需30—50分鐘，稍大一些的淋巴結(jié)、胸腺等組織，可固定1—2小時。時間太長易使組織過度硬化，不利于切片。固定后直接入95％酒精洗滌，然后脫水、透明、包埋。
（6）酒精、甲jia醛（簡稱A．F）液
95％酒精90ml
40％甲jia醛10ml
如需要可加入0.5g的醋酸鈣使其呈中性。此液有固定兼脫水的作用，用于病理快速診斷的制片，也適于肥大細(xì)胞的固定。2—3mm厚的病理組織在50℃固定40分鐘，一般室溫固定12—20小時，固定后可直接入95％酒精脫水。
總之，固定液的種類很多，用時可查閱制片方面的書籍。首先要根據(jù)實驗?zāi)康?，選用固定液。但應(yīng)用時必須首先了解各種混合固定液中的組成成分能否預(yù)先混合，固定后是否需要洗滌，然后再開始配制固定液。
 |
 |
 |
