ELISA試劑盒操作過程中避免刺激 

　　ELISA試劑盒已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。

　　ELISA試劑盒的工作原理：

　　用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成醉終的黃色。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定OD值，計(jì)算樣品濃度。

　　ELISA試劑盒的組成部分：

　　1、血清:操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。

　　2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

　　3、細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

　　4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

　　5、保存:如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。