剛買來的細胞，前幾代養(yǎng)著還行，這越養(yǎng)怎么狀態(tài)越差？后面的實驗可怎么辦？經常「飼養(yǎng)」細胞的小伙伴，應該都遇到或聽說過上述這些情況。影響細胞狀態(tài)的潛在因素有很多，血清就是其中之一。

血清對于細胞實驗的重要性毋庸置疑：提供細胞生長增殖所需的營養(yǎng)物質、提供結合蛋白、幫助細胞貼壁、提供蛋白酶抑制劑、調節(jié)培養(yǎng)體系理化特性等等功能。因此，可以這樣認為：血清品質的優(yōu)劣，一定程度上決定了細胞生長狀態(tài)的好壞。

很多從業(yè)者在挑選血清的時候，只關注到品牌、產地，甚至會哪家打折買哪家，忽略了血清的檢測指標、批次以及解凍儲存情況。那么，這些細節(jié)究竟有何玄/機？下面我們將目光鎖定在這三個方面，揭秘其在細胞培養(yǎng)過程中，導致血清使用效果出現差異的原因，希望可以給各位從事細胞培養(yǎng)相關工作的小伙伴，提供幫助！

一、檢測指標

血清對于細胞培養(yǎng)很重要，要保證血清質量，需要有嚴格的質控，包括從外觀到理化性質、細胞增殖試驗和微生物檢查，制定一系列的標準，以及出廠產品能符合這些標準。

以胎牛血清為例，優(yōu)質的特級胎牛血清，外觀應是淡棕色至橙色透明液體，無顆粒物沉淀；PH 在 6.7-8.2 之間；滲透壓在 260-340mosm/kg 之間；血紅蛋白含量小于 20 mg/dL；總蛋白含量在 30-50 g/L；白蛋白含量在 14-34 g/L；α、β、γ 球蛋白含量則以實際測量為準；IgG 應小于 250 μg/mL；內毒素含量應小于 10EU/mL。

這些指標直接關系到所培養(yǎng)細胞質量的高低。其中的典型代表就是內毒素。健康的胎牛血本身是不含有內毒素的，但是由于采集過程，運輸環(huán)境，生產工藝等多種因素，商業(yè)化的成品胎牛血清不可避免地會檢出內毒素。我們都知道，內毒素參與細胞的衰老、凋亡等進程。長期用內毒素含量高的血清培養(yǎng)細胞，更容易影響細胞正常的生理生化功能，令細胞不知不覺進入「亞健康」的狀態(tài)。細胞健康，實驗結果才能更準確；細胞「萎靡不振」，實驗結果也容易隨之產生偏差。

因此，在挑選血清、查看檢測報告的時候，應重點關注內毒素這一項，選擇內毒素含量低的血清。以 Ausbian 特級胎牛血清為例：經過檢測，其內毒素含量穩(wěn)定小于 3EU/mL，一些批次甚至小于 1.0 EU/mL！「飲食干凈」，細胞狀態(tài)更健康！

二、血清批次

每年全球產的胎牛血清的總量是有限的。正常情況下，胎牛血清是通過剖腹產 5-8 月齡的牛胚胎，采用心臟穿刺采血的方式，經一系列加工處理后得到的。一次采血最多也就 1 到 2 瓶胎牛血清，所以它本身就要比其他血清更為稀少珍貴。

再大的血清制造商，每一批的血清產量都是有限的。不同飼養(yǎng)條件下、不同品種，相同流水線上操作的不同員工，都會導致同一品牌不同批次的血清略有差別。不同批號的血清在同一個實驗中混用，很難保證細胞不會因為「飲食」改變而耍耍實驗數據不穩(wěn)定這樣的「小脾氣」。

那么，該怎樣解決這一難題？每次換血清都從頭驗證？還是和之前的血清混合使用？最行之有效的方法，就挑選一個安全可靠、貨源充足、產品可溯源的品牌！

遠慕提供Ausbian 特級胎牛血清，近二十年服務過千萬細胞培養(yǎng)用戶，澳洲血源，原裝/進口，供貨穩(wěn)定，每個批次產量 800-2000 升，保證大多數項目兩年不需換批次。不僅如此，Ausbian 特級胎牛血清可提供多批次平行供應，會根據用戶的不同需求，挑選符合實驗需求的血清，盡可能減少血清因批次不同而產生的實驗誤差。

三、血清的解凍與儲存

剛到貨的血清應該怎樣儲存？血清到底要怎樣解凍才能保證活性？血清在 4℃ 冰箱能放多久？這些細節(jié)也會影響血清的使用效果。

常規(guī)儲存

首先，剛到貨的血清，趁著它還未融化，趕緊放進-20℃ 冰箱中，避免反復凍融。當然，如果你的課題組不差錢，-80℃ 冰箱空間充足，把血清儲存進去也是沒有問題的。

再來說說血清的解凍。很多從業(yè)者都習慣將血清從-20℃/-80℃ 取出后，直接丟在 4℃ 冰箱甚至是室溫環(huán)境下過夜解凍。這種方法雖然看似方便省心，實則有一定的潛在風險。

科學解凍

我們都知道，在血清這種混合物中，融化速度：蛋白質等干物質 > 水這類溶劑，所以蛋白質會率/先溶解析出，而水還是結成冰的狀態(tài)，導致瓶子中間會出現一根透明的冰柱，而周圍則會呈現上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài)，在使用過程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過高等問題，影響細胞生長。

更重要的一點是，血清中珍貴的生長因子等活性物質，它們在解凍過程中，有著與細胞復蘇類似的經歷，都需要快速解凍才能盡可能保留生物活性。顯然，4℃ 過夜這樣的長時間處理，很有可能會導致一部分「營養(yǎng)成分」的損失，影響細胞生長。

所以，為了更好地保留血清中的活性成分，使細胞培養(yǎng)更穩(wěn)定，我們推薦使用三步法溶解。如果是儲存在-80℃ 的血清，則需提前幾天先轉移至-20℃ 冰箱中（至少 24 小時），再使用三步法溶解，避免溫差過大使血清失活。

需要特別提醒的是，此方法國際通用，適用于所有培養(yǎng)基，在水浴過程中，血清的平面要完/全浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動瓶身，使血清混勻，但搖動中盡量不要產生泡沫！

徹/底解凍血清后，可以根據實驗需求，將其分裝，保證每一份夠一次使用量即可，比如：25 ml/管、50 ml/管等。密封好后趕緊放回-20℃ 冰箱繼續(xù)儲存。需要配制培養(yǎng)基的時候，再從-20℃ 冰箱中取出一管來解凍使用（最好能全部配成培養(yǎng)基，不要有剩余），可以有效避免反復凍融的問題（遵循現用現配、現配現解凍的原則）。配好的培養(yǎng)基可以放到 4℃ 冰箱進行儲存。

看到這里，問題又來了，配好的培養(yǎng)基，或者剩下的那一點點血清，能在 4℃ 冰箱里放多久呢？先給出我們認為比較合理的答案，再來解釋原因：7 天

一般情況下，已經解凍的血清，無論是配成完/全培養(yǎng)基還是在冰箱里備用，都不要超過一周（7 天），原因也很簡單，存放太久，生長因子等物質容易失活，而且比較容易受到污染，影響實驗結果。

其實，無論是日常使用，還是銷售運輸過程中，血清都忌諱反復凍融，不僅容易析出沉淀，造成細胞污染的假象，給實驗人員造成比不要的困擾，而且在一些對營養(yǎng)需求比較特殊的細胞而言，反復凍融析出大量沉淀的血清，可能不足以供給其營養(yǎng)，導致細胞出現生長不良等狀況。

因此，選擇一款運輸途中儲存條件有保障的血清，至關重要。Ausbian 特級胎牛血清及其同系列血清產品，出廠后，全程冷鏈運輸，對反復凍融 Say No！

綜上所述，想要保證細胞狀態(tài)、實驗數據的穩(wěn)定，一款優(yōu)質的血清必不/可少。遠慕可提供各種合適的特級胎牛血清，詳情關注我們哦！