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免疫分析中常用封閉劑介紹及選擇
點擊次數(shù):1191 更新時間:2022-03-28

 在免疫學(xué)實驗中,通常使用封閉劑來減少非特異性結(jié)合。常用的封閉劑有脫脂奶粉,BSA,血清以及 Fab 片段單鏈二抗等。根據(jù)不同的平臺選擇相應(yīng)的封閉劑。

 

 

牛血清白蛋白1.jpg



脫脂奶粉
作用原理:脫脂奶粉含有多種蛋白,可以封閉未吸附蛋白的固相載體(WB 膜、ELISA 板等)位點,減少抗體與之結(jié)合的概率,避免非特異性結(jié)合帶來的高背景。
優(yōu)點:價格便宜,因含多種不同分子量的蛋白,故封閉起來更全面。
缺點:成分復(fù)雜,適用范圍窄。不適用于生/物素和堿性磷酸酶標記的抗體系統(tǒng)。且封閉后的載體不易長期保存,因此在試劑盒的生產(chǎn)中較少應(yīng)用。

牛血清白蛋白BSA
作用原理:同脫脂奶粉,封閉未吸附蛋白的固相載體位點。
優(yōu)點:成分單一,適用于 ELISA 實驗,生/物素、堿性磷酸酶系統(tǒng)的免疫學(xué)檢測實驗或者其他對特異性要求較高的實驗。
缺點:大部分 BSA 中有少量的抗體殘留,會導(dǎo)致抗原/抗體之間的交叉反應(yīng),造成一定背景。

動物血清
作用原理:
1、待檢樣本會有些與蛋白非特異性結(jié)合的物質(zhì),從而導(dǎo)致背景過高,因此可以用血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合,從這點看,血清和 BSA 沒有明顯區(qū)別;
2、待檢樣本中可能會有 Fc 受體,可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合,而封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本 Fc 受體之間結(jié)合。BSA 則無法封閉 Fc 受體。
優(yōu)點:因為血清可以封閉 Fc 受體及減少抗體間的非特異性結(jié)合,故在免疫組化、免疫熒光實驗中有廣泛應(yīng)用。
缺點:某些封閉血清中可能含有疊氮鈉,因此不適用于 HRP 酶標的檢測體系。

Fab 片段單鏈二抗
作用原理:由于二價的抗體(全 IgG 或 F(ab’)2 片段)有兩個結(jié)合位點,不能用來封閉。而 Fab 片段單鏈二抗只有一個結(jié)合位點,因此可*封閉免疫球蛋白。
應(yīng)用:在 IHC 或 IF 雙標/多標實驗中,封閉樣本表面的免疫球蛋白,封閉組織切片或細胞表面的內(nèi)源性免疫球蛋白,并可解決兩個一抗來自同一種屬的麻煩。

無蛋白封閉劑---新型高效封閉劑
Blocker 無蛋白封閉劑,該封閉劑是通過化學(xué)合成高親水性化合物,不存在生物封閉劑所擔心的生物安全性、質(zhì)量、批間差等問題。
主要特點:
1)與微球表面活化的羧基偶聯(lián)形成穩(wěn)定的共價鍵
2)純化學(xué)合成,批間差小,純度高
3)空間結(jié)構(gòu)簡單,更充分的封閉微球表面,降低微球非特異性吸附,減少基質(zhì)干擾
4)提高試劑靈敏度
5)含大量親水基團,有利于提高試劑穩(wěn)定性
應(yīng)用領(lǐng)域:乳膠免疫比濁試劑/ 化學(xué)發(fā)光試劑 ,代替 BSA 作為封閉劑或與 BSA 聯(lián)合封閉。

免疫試劑穩(wěn)定液
免疫試劑穩(wěn)定液主要用于免疫分析檢測試劑/抗原/抗體/蛋白的保存.  該產(chǎn)品屬于即用型,無需稀釋,使用簡單方便,將待保存物質(zhì)溶于穩(wěn)定液中后置于冰箱即可。免疫試劑穩(wěn)定   液有利于維持蛋白的三維結(jié)構(gòu),保持蛋白的生物活性,可延長免疫分析試劑及蛋白的使用期限,確保產(chǎn)品的性能。
應(yīng)用領(lǐng)域:
1)免疫分析試劑保存, 如免疫比濁檢測試劑/化學(xué)發(fā)光檢測試劑
2)蛋白質(zhì)保存,如抗原/抗體/酶類等

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