ELISA間接法和雙抗夾心法的原理與優(yōu)缺點(diǎn)

　　一、間接法ELISA

　　原理：將抗原與固相載體相連結(jié)，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，加酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合，從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，加底物顯色。

　　優(yōu)點(diǎn)：酶標(biāo)二抗可加強(qiáng)信號，提高靈敏度；靈活性更大，同一酶標(biāo)二抗可應(yīng)用于多種不同的一抗；不直標(biāo)一抗，可保留更多的免疫反應(yīng)性；成本更低，使用標(biāo)記抗體更少。

　　缺點(diǎn)：交叉反應(yīng)幾率升高。

　　二、雙抗夾心法ELISA

　　原理：雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子，但不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加入待檢樣品，保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。加酶標(biāo)抗體（檢測抗體）保溫孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。加底物反應(yīng)。

　　雙抗原夾心法測抗體的反應(yīng)模式與測抗原相似，用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體。

　　優(yōu)點(diǎn)：高特異性，使用的捕獲抗體與檢測抗體都是檢測特異性的；適用于復(fù)雜樣品，抗原不需要進(jìn)行純化即可用于檢測；靈活性更大，靈敏度更高，可采用直接法也可采用間接法。

　　缺點(diǎn)：檢測物需要擁有兩個以上不同的抗原表位或多個相同的重復(fù)表位；不適用于檢測小分子物質(zhì)。