抗體作為免疫基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中常用的試劑，WB、IHC、IF、FC實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中都會(huì)用到抗體，如何正確使用抗體，其中稀釋液的選擇非常重要，不同的生產(chǎn)廠家對(duì)抗體稀釋液的要求都不一樣，一般常見(jiàn)的稀釋液是自己配置5%脫脂奶粉或者5%BSA溶液。
 

　　各種抗體稀釋液的配置方法和配方！
 

　　辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體稀釋液的配制：
 

　　1%牛血清白蛋白(穩(wěn)定劑)；
 

　　0.1%冷魚(yú)皮明膠(堵)；
 

　　0.05%硫柳汞(防腐劑)；
 

　　0.01MPBSpH7.2；
 

　　注：
 

　　1)抗體稀釋使用該緩沖區(qū)可以存儲(chǔ)在4oC 6個(gè)月未還原的結(jié)合活性。
 

　　2)不要用BSA或其他含血清試劑稀釋二抗因?yàn)樗麄兛赡芘c牛血清白蛋白或血清抗體的親和性降低。
 

　　3)用TBS稀釋二抗常常產(chǎn)生較弱的染色。所以用TBS只有抗體高背景染色和堿性磷酸酶標(biāo)記抗體由于磷酸鹽抑制堿性磷酸酶的活性。
 

　　辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素稀釋液：
 

　　0.01MPBS，pH7.2；
 

　　0.05%硫柳汞(防腐劑)；
 

　　注：
 

　　抗體稀釋使用這個(gè)緩沖區(qū)可以存儲(chǔ)在4oC6個(gè)月未還原的結(jié)合活性。
 

　　AP鏈霉親和素稀釋液：
 

　　0.05TBS，pH值7.60.05%硫柳汞(防腐劑)；
 

　　注：
 

　　1)抗體稀釋使用該緩沖區(qū)可以存儲(chǔ)在4oC6個(gè)月未還原的結(jié)合活性。
 

　　2)PBS不能因?yàn)榱姿猁}抑制堿性磷酸酶的活性稀釋劑-美聯(lián)社。熒光染料(AvidinFITC標(biāo)記的抗生物-素蛋白生物-素，德克薩斯紅，AMCA)
 

　　稀釋緩沖液：
 

　　0.01MPBS，pH7.20.05%硫柳汞(防腐劑)。
 

　　原抗體稀釋緩沖液：
 

　　1%牛血清白蛋白(穩(wěn)定劑和阻塞)；
 

　　0.1%冷魚(yú)皮明膠；0.05%疊dan化鈉；
 

　　0.01MPBSpH7.2(pH7.6的TBS用于初級(jí)抗體稀釋液產(chǎn)生弱染色)；
 

　　注：
 

　　1)抗體稀釋使用該緩沖區(qū)可以存儲(chǔ)在4oC6個(gè)月未還原的結(jié)合活性。
 

　　2)這個(gè)緩沖區(qū)不能用于稀釋辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體的疊dan化鈉酶抑制劑。
 

　　使用時(shí)按照抗體效價(jià)(或個(gè)人優(yōu)化條件)，將適量抗體加入抗體稀釋液即可。例如，效價(jià)為1：100時(shí)，可將10ul抗體加入到1ml抗體稀釋液中，充分混勻后即可使用?？贵w現(xiàn)用現(xiàn)稀釋，稀釋后的抗體2-8℃可以短期保存，但抗體的效價(jià)會(huì)隨時(shí)間而降低。