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【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF參數(shù)說明】
中文名：苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF
英文名：Benzamidine Sepharose 4FF
供應(yīng)商：上海遠慕
基質(zhì)：4%交聯(lián)瓊脂糖
形狀：球形
粒徑：45~165 μm
耐壓：0.3MPa
耐熱：120℃,pH7,水中20min
zui高流速：250cm/h
排阻極限：60000~20×106 (球蛋白)
【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF】參數(shù)說明_化學(xué)性質(zhì)_操作步驟
【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF化學(xué)性質(zhì)】
外觀：本品為乳白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。
保存：產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20% 乙醇)，通風(fēng)、干燥、清潔的地方;不能冷凍，用過的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)。
保質(zhì)期：暫定5年。
應(yīng)用：本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì)，具有非特異性吸附低，回收率高，可多次重復(fù)使用等特點，用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠色譜純化。
用途：生化研究;巨大分子病毒、疫苗的分離。
化學(xué)穩(wěn)定性：以下溶液中40℃下穩(wěn)定;2mol/L NaOH;70%EtOH;30%異丙醇;30%乙腈;1%SDS;6mol/L鹽酸胍;8mol/L尿素。
性狀：含20%乙醇，底部為乳白色膠體。高度偶聯(lián)的瓊脂糖凝膠，大大加強了機械性能，快流速;經(jīng)去電核處理，非特異性吸附極低，樣品回收率高;*的化學(xué)穩(wěn)定性，可用多種促溶劑、有機溶劑操作和1-2M NaOH在位清洗。
【苯甲脒-瓊脂糖凝膠 4FF操作步驟】
1.裝柱：
a、讓所有的材料和試劑達到室溫;配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
b、根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3：1的比例)配成勻漿。
c、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無氣泡。
d、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡;打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
e、打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定;用2~3柱體積的緩沖液平衡柱子。
2.平衡：
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變;平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3.上樣：
a、樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
b、一般情況是讓目標產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標產(chǎn)品。
c、介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強度和溫度;鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強，介質(zhì)對組分吸附牢。
4.洗脫：
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進行洗脫;加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫;zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
5.再生：
一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用;若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。
6.在位清洗：
a、對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。
b、對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1MNaOH去除。
c、對強疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡;清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7.去熱源：
用0.5M的*清洗柱子5~6小時或用0.1M的*24小時;或用以下方法步驟去除：
a、2倍柱體積的70%乙醇;
b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;
c、1倍柱體積4M尿素;
d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNaCl;上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
8.消毒：
用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
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