緩沖液是一種能在加入少量酸或堿和水時抵抗pH改變的溶液。PH緩沖系統(tǒng)對維持生物的正常pH值，正常生理環(huán)境起重要作用。多數(shù)細胞僅能在很窄的pH范圍內(nèi)進行活動，而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現(xiàn)的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩沖體系，它們時蛋白質(zhì)、重碳酸鹽緩沖體系。每種緩沖體系所占的分量在各類細胞和器官中是不同的。

    在生化研究工作中，常常要用到緩沖溶液來維持實驗體系的酸堿度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到我們工作的成效。如果提取酶實驗體系的pH值變化或變化過大，會使酶活性下降甚至*失活。所以我們要學會配制緩沖溶液。

    由弱酸及其鹽組合一起使具有緩沖作用。生化實驗室常常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羥甲基氨基甲烷）等系統(tǒng)，在生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因為有時影響實驗結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的反應。

    硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復鹽、如蔗糖。

    檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用。

    磷酸鹽：在有些實驗，它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物，重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來。而且它在pH7.5以上時緩沖能力很小。

    三羥甲基氨基甲烷：它可以和重金屬一起作用，但在有些系統(tǒng)中也起抑止的作用。其主要缺點時溫度效應。這點往往被忽視，在室溫pH是7.8的Tris一緩沖液，在4℃時是8.4,在37℃時是7.4,因此，4℃配制的緩沖液拿到37℃測量時，其氫離子濃度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，緩沖能力很差。

    緩沖液的pH值由哪些因素決定？

    設緩沖系統(tǒng)的弱酸的電離常數(shù)為K（平衡常數(shù)），平衡時弱酸的濃度為[酸],弱酸鹽的濃度為[鹽],則由弱酸的電離平衡式可得下式：

    根據(jù)此式可得出下列幾點結(jié)論：

    （1）緩沖液的pH值與該酸的電離平衡常數(shù)K及鹽和酸的濃度有關(guān)。弱酸一定，但酸和鹽的比例不同時，可以得到不同的pH值。當酸和鹽濃度相等時，溶液的pH值與PK值相同。

    （2）酸和鹽濃度等比例也增減時，溶液的pH值不便。

    （3）酸和鹽濃度相等時，緩沖液的緩沖效率為zui高，比例相差越大，緩沖效率越低，一般地說緩沖液有效緩沖范圍為PK±1pH.

    從上述可知，只要知道緩沖對的PK值，和要配制的緩沖液的pH值（及要求的緩沖液總濃度）時，可按公式計算出[鹽]和[酸]的量。這樣算涉及到對數(shù)的換算，較麻煩，前人為減少后人的計算麻煩，經(jīng)計算已為我們總結(jié)出pH值與緩沖液對離子用量的關(guān)系列出了表格。講義附錄部分節(jié)錄有磷酸緩沖液的配制表。只要我們知道要配制的緩沖液的pH,經(jīng)查表便可計算處所用緩沖劑的比例和用量。例如配制500nmpH5.8濃度為0.1M磷酸緩沖液。

    經(jīng)查表知pH5.8濃度為0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推論出配制100ml0.1M的磷酸緩沖液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。

    計算好后，按計算結(jié)果稱好藥品，放于燒杯中，加少量蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)移入50ml容量瓶，加蒸餾水至刻度，搖勻，便得所需的緩沖液。

    各種緩沖溶液的配制，均按下表按比例混合，某些試劑，必須標定配成準確的濃度才能進行，如醋酸、NaOH等。