目的：考察目前市場上常用總膽紅素試劑盒的檢驗(yàn)方法。
方法：選取5個廠家生產(chǎn)的試劑盒(均為重氮法)，按其說明書要求分別用帶血清空白的終點(diǎn)法或不帶血清空白的終點(diǎn)法檢測其線性和準(zhǔn)確性。
結(jié)果：各試劑盒線性r＞0.99，準(zhǔn)確性在1%～10%波動。結(jié)論：使用終點(diǎn)法測定總膽紅素試劑盒，應(yīng)使標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化。
人紅細(xì)胞的壽命一般為120 d，紅細(xì)胞死亡后變成間接膽紅素（I-Bil），經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)化為直接膽紅素（D-Bil），組成膽汁，排入膽道，zui后經(jīng)大便排出。間接膽紅素與直接膽紅素之和就是總膽紅素（T-Bil）。
上述的任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙，均可使人發(fā)生溶血性黃疸、肝細(xì)胞性黃疸和阻塞性黃疸。肝炎患者的黃疸一般為肝細(xì)胞性黃疸，也就是說直接膽紅素與間接膽紅素均升高，而淤膽型肝炎的患者以直接膽紅素升高為主?？偰懠t素的正常值為1.71～17.1 μmol/L(1～10 mg/L)，直接膽紅素的正常值為1.71～7 μmol/L(1～4 mg/L)。
因此，臨床上對于用測定血清總膽紅素來鑒別黃疸有較大意義，它對肝臟疾病診斷、治療和愈后判斷有重要價值。我們對總膽紅素試劑盒中試劑的線性和準(zhǔn)確性進(jìn)行研究，不僅可以有效的節(jié)約原材料、降低生產(chǎn)成本、規(guī)范行業(yè)，對臨床檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，也大有幫助。
1 儀器與試藥
半自動生化分析儀（SECOMAM公司生產(chǎn)，型號：BASIC）；總膽紅素測定試劑盒（選用五個廠家生產(chǎn)的，編號依次為1～5號，在這5個廠家生產(chǎn)的試劑盒中，只有兩個試劑盒即1號試劑盒和2號試劑盒中自帶標(biāo)準(zhǔn)品，其濃度分別為171 μmol/L和20 μmol/L）；總膽紅素標(biāo)準(zhǔn)液；多項(xiàng)液體生化質(zhì)控血清。
2 方法
2.1 實(shí)驗(yàn)原理
重氮法：總膽紅素在二甲亞砜等加速劑作用下，在酸性溶液中與重氮苯磺酸作用生成紫色的偶氮膽紅素，與經(jīng)過同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可計(jì)算出樣品中膽紅素的含量。
2.2 試驗(yàn)方法
2.2.1 線性關(guān)系取總膽紅素（T-Bil）高濃度樣本，通過采用樣品量加倍模式（高值血清低于線性范圍上*）或用生理鹽水稀釋成一系列濃度，zui高濃度應(yīng)大于或等于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定線性范圍上限值（5個試劑盒的加樣量及加樣方法詳見表1~ 5），每個濃度重復(fù)測定2次，取其吸光度平均值與對應(yīng)的理論濃度值進(jìn)行回歸分析，求相關(guān)系數(shù)r。
2.2.2 準(zhǔn)確性取一定值血清（濃度為24.8 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)液），按線性項(xiàng)下各表中定標(biāo)的加樣方式和試驗(yàn)步驟進(jìn)行測定，重復(fù)3次，取其均值計(jì)算偏差。然后按以下公式計(jì)算各樣品的檢測誤差。
誤差=( 測定值-24.81 /24.8)×100%
3 結(jié)果
3.1 線性
將試劑盒各濃度吸光度均值與其對應(yīng)的理論濃度回歸，計(jì)算回歸系數(shù)r值。
3.2 準(zhǔn)確性
檢測結(jié)果如表所示。
4 討論
總膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品很不穩(wěn)定，根據(jù)線性結(jié)果來看，雖然相關(guān)系數(shù)r很好，但吸光度所得值或全部升高或全部降低，即吸光度的增加與其相應(yīng)的理論濃度不呈正比關(guān)系。在有些標(biāo)準(zhǔn)中要求所得值與理論值的偏差應(yīng)≤10%，如按這一要求來判定線性，總膽紅素的線性就遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到要求，所以考慮到總膽紅素試劑盒這一特殊性，在標(biāo)準(zhǔn)中不但要求r值，同時還應(yīng)要求所得值與理論值的偏差。
在分析方法學(xué)上，本次試驗(yàn)采用的是一點(diǎn)定標(biāo)法。在做線性這一項(xiàng)目檢測時，由于總膽紅素試劑盒中說明書要求的試劑與標(biāo)準(zhǔn)液的比例較低，這就要求必須要用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液來定標(biāo)和做線性，但如果用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液定標(biāo)后，再做準(zhǔn)確性時，對準(zhǔn)確性的結(jié)果影響卻非常的大。如果在試驗(yàn)中用高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)做線性，再用低濃度的標(biāo)準(zhǔn)液定標(biāo)做準(zhǔn)確性，這樣得出的結(jié)果雖好，但卻也失去了檢測的意義。對于很多診斷試劑來說，因?yàn)榭紤]到操作簡便，標(biāo)準(zhǔn)曲線法基本上是一個被淘汰了的方法。
總膽紅素濃度在171 μmol/L以內(nèi)線性良好，高于此值時可用生理鹽水將血清稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，且總膽紅素在10～37℃范圍內(nèi)測定不受溫度變化的影響，呈色在2 h內(nèi)非常穩(wěn)定。在實(shí)驗(yàn)中雖然都用的是終點(diǎn)法且反應(yīng)原理一樣，但有些帶血清空白，有些又不用帶血清空白。因?yàn)樵谠囼?yàn)前都是要清除試劑空白，血清空白對結(jié)果到底有怎樣的影響還值得研究。
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