A549細(xì)胞的培養(yǎng)

    A549細(xì)胞為人肺腺癌細(xì)胞，屬于傳代細(xì)胞系，可穩(wěn)定地傳代培養(yǎng)。一般用胰酶消化后，加入生長液稀釋，以1：2～1：3傳代培養(yǎng)都是可行的。

    一、[所需溶液]

    1，細(xì)胞沖洗液：磷酸鹽緩沖液(PBS)——無Ca、Mg

    NACL8.00g；

    KCL0.20g;

    KH2PO40.20g;

    Na2HPO4.。12H2O1.15g

    加水至1000mL,將PH調(diào)至7.4，高壓滅菌。

    2，消化液

    （1）胰酶-PBS

    結(jié)晶胰酶2.5g;

    高壓滅菌后的PBS1000ml

    用磁力攪拌器攪拌均勻，使其*溶解，通過0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝備用，放置—20℃保存。

    （2）胰酶—EDTA:

    結(jié)晶胰酶0.5g;

    EDTA鹽溶液0.2g

    無Ca、MgPBS1000ml

    用磁力攪拌器攪拌均勻，使其*溶解，通過0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝備用，放置—20℃保存。

    1，細(xì)胞培養(yǎng)液：RPMI1640培養(yǎng)液

    配制方法：

    （1）將一袋干粉型RPMI1640培養(yǎng)基溶于900ml三蒸水中，沖洗包裝袋兩至三次倒入培養(yǎng)液中。

    （2）加入丙酮酸鈉0.1g，NaHCO22g以及雙抗，加入磁力攪棒并置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?。雙抗的配置濃度為100U/ML青霉素和100U/ML鏈霉素。(一般市售的青霉素為80萬U/瓶，將其溶解于4ml三蒸水中，每升培養(yǎng)液中加入0.5ml；市售的鏈霉素為100萬U/瓶，將其溶解于5ml三蒸水中，每升培養(yǎng)